AI？系统？原来是我老公！ 第一百零三章 问题可能出在样本采集时间上

第二天一早，温楚莹拿着图表冲进会议室。

“教授、张老师、师姐，我发现问题可能出在样本采集时间上！”

她把图表摊在桌上，

“你们看，下午 2 点采集的样本，环境温度 2℃左右，Ct 值波动最小；

上午 10 点温度 - 2℃，Ct 值普遍偏高，而且波动大。

我怀疑低温会抑制耐药基因的表达，导致检测时扩增效率不稳定。”

张老师凑过来看，手指点在图表上：

“这个规律…… 有点像我之前看过的一篇文献，

里面提到极端环境微生物有‘温度适应性表达’特性，低于 0℃时，耐药基因的启动子活性会下降 50%。

我当时觉得和咱们的样本关联不大，就没提。”

王教授的眼睛亮了：

“那咱们就做验证实验！今天分三个时间点采集：上午 10 点、下午 2 点、下午 4 点，

每个时间点采 3 份样本，统一在 4℃条件下保存，然后同时检测，看数据差异。”

采集团队按照安排行动，下午五点，样本准时送到实验室。

温楚莹和李师姐立刻开始处理 —— 统一离心 10 分钟，加 5% 甘油保存，然后同时加载到三台 PCR 仪上。

等待结果的四十分钟里，没人说话，大家都盯着仪器屏幕，连王教授都时不时看一眼手表。

“出来了！” 李师姐先喊出声。

屏幕上，下午 2 点采集的样本 Ct 值分别是 28.5、28.7、28.6，波动只有 0.1；

下午 4 点的是 29.2、29.4、29.3，波动 0.1；

而上午 10 点的是 32.1、32.5、32.3，波动 0.4，且整体 Ct 值偏高。

“真的是采集时间的问题！” 张老师激动地拍了下桌子，“楚莹，你立大功了！”

可温楚莹却没立刻松气：

“但上午的样本 Ct 值还是偏高，要是采集团队遇到特殊情况，只能上午采集怎么办？咱们得想办法让上午的样本也能稳定检测。”

王教授点头：“说得对。张老师，你查文献看看有没有能激活低温下耐药基因表达的试剂；

楚莹，你试试在样本处理时加入不同浓度的诱导剂，比如 IPTG，看看能不能改善；

李黎，你负责优化样本保存的温度梯度。”

接下来的两天，团队又进入新的攻坚。

温楚莹测试了 0.1mmol/L、0.2mmol/L、0.3mmol/L 三种浓度的 IPTG，

结果 0.2mmol/L 时，上午样本的 Ct 值降到了 29.5 左右，波动 0.3，接近下午样本的水平。

可新的问题又出现了 —— 加入 IPTG 后，样本的非特异性扩增增加，出现了杂峰。

“怎么办？杂峰要是不消除，会影响结果判断。” 李师姐看着屏幕上的杂峰，皱起眉。

温楚莹盯着杂峰的位置，突然想起在学校做竞赛时，林导师教过的 “引物特异性优化法”：

“咱们调整一下引物的退火温度，之前用的是 58℃，试试 59℃和 60℃，看看杂峰会不会消失。”

她做了三个温度梯度的实验，当退火温度升到 59.5℃时，杂峰果然消失了，Ct 值稳定在 29.3±0.2。

“成功了！” 她忍不住欢呼，小初砚在意识里放起了虚拟烟花：“宿主太棒啦！终于解决了！”

解决了采集时间的问题，团队开始优化检测效率。

原来的检测方法需要 6 小时，王教授希望能缩短到 2 小时以内，方便应急使用。

温楚莹想起在学校研究的 “双段控温法”—— 将退火和延伸阶段的温度整合，减少升温降温的时间。

她先做了温度梯度实验：退火温度 59℃、延伸温度 72℃，之前是分两步各 30 秒，

现在尝试将温度设为 65℃，一步 40 秒，看看扩增效率。

第一次实验，扩增效率降到了 80%，低于标准的 90%。

“是不是温度太高了？” 张老师过来查看，“65℃可能让引物结合不充分，试试 63℃。”

温楚莹调整到 63℃，一步 45 秒，扩增效率升到 85%，还是不够。

小初砚在意识里帮她模拟不同的温度和时间组合：

“宿主，试试 64℃，一步 42 秒，我计算了一下，这个条件下引物结合效率和酶活性的平衡最好。”

她按照小初砚的建议调整，这次的扩增效率达到了 92%，Ct 值波动 0.2，检测时间缩短到 1.8 小时。

“再优化一下，把预变性时间从 2 分钟降到 1 分钟，看看能不能再快一点。” 王教授建议。

温楚莹试了预变性 1 分钟，结果扩增效率没下降，检测时间最终定格在 1.5 小时。

这章没有结束，请点击下一页继续阅读！