下午的实验聚焦 “吐温 - 20 浓度优化”,这是绘制 “极端重力 - 耐药基因表达” 图谱的关键前置实验。
此前采用 0.5% 吐温 - 20 浓度时,虽能将 1.0G 重力环境下的微生物裂解率提升至 82%,
但昨日实验中,温楚莹通过微生物成像系统观察到,
该浓度导致 31% 的微生物细胞壁破裂过度,产生的细胞碎片使基因提取纯度从 95% 降至 81%,严重影响后续检测准确性。
她立即停止常规实验,将问题整理成加密报告:
“1.0G 重力条件下,0.5% 吐温 - 20 浓度导致微生物细胞壁过度裂解,
细胞碎片干扰基因提取,需通过浓度梯度实验优化,
建议设置 0.3%、0.4%、0.5%、0.6% 四组变量,同步监测细胞壁完整性与裂解效率相关性”,
通过内部加密系统发送给孙教授。
仅 28 分钟后,孙教授的回复传来:
“同意方案,补充要求:每组设置 6 个平行样本,采用方差分析验证数据可靠性,
同步用成像系统记录细胞形态学参数(细胞壁厚度、完整性评分、碎片粒径分布)”。
当孙教授抵达核心实验区时,温楚莹已完成实验准备:
四组不同浓度的吐温 - 20 溶液均按无菌操作配制完毕,标注加密编号 “TW-0.3-01 至 TW-0.6-06”;
1.0G 重力模拟样本经解冻、稀释后,已分装至 24 个无菌离心管,每管样本量精准控制在 200μL,
误差≤±1μL;微生物成像系统已完成校准,放大倍数设定为 400 倍,焦距校准误差≤0.01μm。
两人身着二级防护服,隔着无菌操作台默契配合。
孙教授负责吐温 - 20 溶液的最终浓度复核:
用紫外分光光度计检测各组吸光度,
确认 0.3% 组吸光度为 0.124、
0.4% 组为 0.165、
0.5% 组为 0.207、
0.6% 组为 0.249,
与理论值偏差≤±0.003,符合实验要求后,逐一标注 “复核合格”。
温楚莹则专注于样本处理:
按 “样本管编号对应吐温 - 20 浓度组” 的原则,用经校准的移液器精准加入 20μL 对应浓度溶液,
每加完一组就用酒精棉片擦拭移液器枪头座,避免交叉污染;
将加样后的离心管放入恒温振荡仪,设置振荡频率 180rpm、温度 25.0℃、时间 15 分钟,
振荡结束后立即转移至微生物成像系统样本台。
“楚莹,重点记录细胞壁完整性评分(1-5 分,5 分为完整)和裂解效率,
每 10 分钟采集一次图像数据。”
孙教授一边整理实验记录,一边提醒,
“注意成像系统的光源强度稳定在 1200lux,避免光照差异影响形态观察。”
“明白。” 温楚莹调整成像系统参数,屏幕上清晰呈现出各组微生物形态:
0.3% 浓度组中,微生物细胞壁完整性评分为 4.2 分,裂解效率仅 68%,内部核酸物质未充分释放;
0.6% 浓度组中,细胞壁完整性评分降至 2.1 分,裂解效率虽达 91%,但细胞碎片粒径集中在 0.1-0.3μm,占比达 42%,易导致基因提取时的柱堵塞;
当浓度调整为 0.4% 时,细胞壁完整性评分为 3.5 分,裂解效率 85%,细胞碎片占比仅 12%,且碎片粒径≥0.5μm,可通过后续离心步骤有效去除。
“就定 0.4%!” 孙教授凑过来看成像数据报表,指尖点在统计栏,
“这个浓度下,裂解效率与基因提取纯度达到最优平衡,符合后续检测要求。”
他补充道,“将今天的 24 组样本形态照片按‘浓度 - 时间 - 参数’格式加密归档,
文件名标注‘1.0G - 吐温 - 20 优化 - 202X0915’,同步生成形态学分析报告,纳入核心实验数据池。”
傍晚实验告一段落。
温楚莹严格遵循保密手册流程收尾:
先将所有样本残渣放入黄色生物安全处理箱,经高压灭菌处理后标注 “待销毁”;
用 0.5% 含氯消毒水擦拭操作台,按 “从内到外、S 形擦拭” 原则,确保无任何实验残留;
关闭仪器时,先锁定操作参数,再断开电源,最后在仪器使用日志上记录
“13:00-18:00,1.0G 重力吐温 - 20 浓度优化实验,仪器运行正常,参数已锁定”。
整理数据时,她采用 “重力参数 - 温度 - 吐温 - 20 浓度 - 基因表达量 - 形态学参数” 五维分类法,
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